Ako vykonávať sériové riedenia

Obsah

• stupňa
• Metóda 1 Vykonajte jednoduché riedenie
• Metóda 2 Vypočítajte konečný zrieďovací faktor a koncentráciu

V chémii riedenie spočíva v znížení koncentrácie daného roztoku. Sériové riedenie je jednoducho opakované riedenie pôvodného roztoku na rýchle zosilnenie zrieďovacieho faktora. Tento typ riedenia sa často uskutočňuje počas experimentov vyžadujúcich vysoko zriedené roztoky a vysokú presnosť, ako sú roztoky zahŕňajúce koncentračné krivky na logaritmickej stupnici alebo tie, ktoré umožňujú vypočítať hustotu baktérií v určitých médiách. Často sa vykonávajú v biochémii, mikrobiológii, farmakológii alebo chémii.

stupňa

Metóda 1 Vykonajte jednoduché riedenie

1. 
   

   
   Určite správnu riediacu kvapalinu (alebo riedidlo). Výber riedidla je veľmi dôležitý a závisí od roztoku, ktorý chcete riediť. Riedidlo je často destilovaná voda, ale nie je systematické. V prípade roztoku obsahujúceho baktérie alebo bunky sa teda namiesto toho použije kultivačné médium. Pre sériové riedenie sa vo všetkých skúmavkách používa rovnaké riedidlo.
   • Ak si nie ste istí, ktoré riedidlo použiť, získajte pomoc od kompetentnej osoby alebo sa pozrite na internet, čo ľudia musia urobiť pre podobný zážitok.

2. 
   

   
   Pripravte si niekoľko skúmaviek obsahujúcich 9 ml riediacej kvapaliny. Tieto skúmavky sa použijú na postupné riedenie. Princíp je jednoduchý, odoberiete vzorku východiskového roztoku a prenesiete ho do ďalšej skúmavky, potom odoberiete vzorku tejto skúmavky a vložíte ju do ďalšej, atď.
   • Pred začatím riedenia je vhodné vopred identifikovať skúmavky, aby sa predišlo zámene neskôr.
   • V každej skúmavke budete mať koncentráciu o desať nižšiu ako v predchádzajúcej. Prvá skúmavka bude obsahovať zriedený roztok v desiatom, druhom, stom, treťom, tisícine atď. Stanovte vopred počet riedení, aby ste predišli výrobe ďalších skúmaviek, ako je potrebné, a zbytočne riedidla na odpad.

3. 
   

   
   
   
   Pripravte si skúmavku so svojím materským roztokom. Vložte najmenej 2 ml. Minimálne množstvo zásobného roztoku na sériové riedenie je jeden mililiter. Nechajte 2 ml pre prípadné druhé riedenie. Túto skúmavku materského roztoku môžete označiť ako „SM“.
   • Pred začatím sériového riedenia počiatočný roztok dobre premiešajte.

4. 
   

   
   Vykonajte prvé riedenie. Napipetujte 1 ml zásobného roztoku do skúmavky označenej „SM“ a preneste toto množstvo do označenej skúmavky. 1/10 ktorý už obsahuje 9 ml riediacej kvapaliny. Miešaním sa získa homogénny roztok. V tejto skúmavke je teraz 10 ml roztoku: 1 ml zásobného roztoku a 9 ml riediacej kvapaliny. Toto nové riešenie je desaťkrát menej koncentrované ako predchádzajúce riešenie.

5. 
   

   
   
   
   Vykonajte druhé riedenie. V druhom sériovom riedení natiahnete 1 ml označeného roztoku skúmavky 1/10 a vylejete ju do skúmavky 1/100 ktorý už obsahuje 9 ml riediacej kvapaliny. Rúrka 1/10 pred odberom vzoriek budú dobre premiešané. Po dokončení prenosu skúmavku dobre premiešajte 1/100, Roztok zo značenej skúmavky 1/10 je 10-krát koncentrovanejší než v označenej skúmavke 1/100.

6. 
   

   
   V prípade potreby zopakujte túto manipuláciu. Tento postup sa môže opakovať toľkokrát, kým sa nedosiahne požadované riedenie. Pre experiment zahŕňajúci koncentračné krivky môžete takto získať sériu roztokov s riedením na jednotku, desatinu (1/10), stotinu (1/100) alebo tisícinu (1/1000).

Metóda 2 Vypočítajte konečný zrieďovací faktor a koncentráciu

1. 
   

   
   Vypočítajte pomer konečné riedenie po sériovom zriedení. Celkový pomer riedenia sa získa vynásobením zrieďovacieho faktora samotným toľkokrát, koľko je riedení. Matematicky je tento vzorec nasledovný: D_T = D₁ x D₂ x D₃ x ... x D_ns D_T predstavuje celkový zrieďovací faktor a D_n, pomer riedenia.
   • Predpokladajme teda, že 4-krát za sebou vykonáte riedenie tekutiny 1/10. Vo vzorci nahraďte zrieďovací faktor jeho hodnotou: D_T = 10 x 10 x 10 x 10 = 10 000
   • Konečný zrieďovací faktor štvrtej skúmavky v sériovom riedení je 1/10 000. Koncentrácia roztoku poslednej skúmavky je teraz 10 000-krát nižšia ako koncentrácia pôvodného roztoku.

2. 
   

   
   Po zriedení stanovte koncentráciu roztoku. Ak chcete nájsť konečnú koncentráciu roztoku po sériovom riedení, musíte poznať počiatočnú koncentráciu. Vzorec je potom: C_záverečný = C_{počiatočné}/ As C_záverečný predstavuje konečnú koncentráciu zriedeného roztoku, C_{počiatočné}- koncentrácia zásobného roztoku a - D, pomer zriedenia stanovený vopred.
   • Ak teda riedite bunkový roztok s koncentráciou 1 000 000 buniek na ml a váš riediaci pomer bol nastavený na 1 000, aká bude konečná koncentrácia zriedenej vzorky?
   • Použite vzorec:
     • C_záverečný = C_{počiatočné}/ A
     • C_záverečný = 1 000 000/1 000
     • C_záverečný = 1 000 buniek / ml

3. 
   

   
   Venujte pozornosť použitým jednotkám. Pri výpočtoch vždy skontrolujte, či používate rovnaké jednotky. Ak teda začnete s koncentráciou buniek na ml, váš konečný výsledok bude tiež v bunkách na ml. Ak je vaša počiatočná koncentrácia v dieloch na milión (ppm), vaša konečná koncentrácia bude v dieloch na milión.